碱性磷酸酶活性检测试剂盒（货号：AKFA）
碱性磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的含锌糖蛋白酶，广泛分布于人体各脏器中，可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物，通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，生成磷酸根离子和自由羟基。碱性磷酸酶可作为免疫诊断试剂的标记酶，并在骨骼、肝胆系统疾病的诊断和鉴别方面具有重要应用。
碱性磷酸酶在碱性环境中能够催化磷酸苯二钠生成游离酚，酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应生成红色亚醌衍生物，产物在nm处具有特征吸收峰，通过吸光值增加速率即可表征碱性磷酸酶的活性。
碱性磷酸酶活性检测原理测定过程中所需要的仪器和试剂：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
1.粗酶液的制备（可根据预实验结果适当调整样本量及比例）
①组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：（5-10）的比例（建议称取0.1g组织，加入1mL提取液）处理样品，冰浴匀浆，4℃g离心10min，取上清置于冰上待测。
②细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（10个）：提取液体积（mL）为（-）：1的比例（建议万细菌或细胞加入1mL提取液）处理样品，冰浴超声破碎细菌或细胞（功率W，超声3s，间隔7s，总时间3min），4℃g离心10min，取上清置于冰上待测。
③血液、培养液等液体样本：直接测定或使用提取液适当稀释后再进行测定。
2.测定步骤
①分光光度计预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
②在离心管中依次加入下列试剂：
吸光值测定：测定nm处测定吸光值，记为A测定、A对照、A标准和A空白；计算A测定=A测定-A对照，A标准=A标准-A空白。注：空白管只需测定1-2次，每个测定管均需设一个对照管。
标准曲线的建立：以4.0、3.0、2.0、1.0、0.5、0.25μmol/mL为横坐标（x），以其对应的A标准为纵坐标（y），绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将A测定带入公式中得到x（μmol/mL）。
①加入试剂三后必须立即混匀，否则显色不完全；
②待测样本需当天制备且完成检测；
③为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，过程中问题请您及时与工作人员联系。
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