蛋白磷酸化是在酶的催化作用下,将ATP中γ位的磷酸基团转移至蛋白质氨基酸侧链上的过程。蛋白质磷酸化在控制诸如增殖、分化和凋亡等生物过程中发挥着重要作用。
了解蛋白质磷酸化过程首先需要对磷酸化蛋白或肽段进行纯化富集,之后进行蛋白质磷酸化测序,根据磷酸化肽段或残基序列进一步确定磷酸化位点,最终确定磷酸化修饰蛋白对细胞生命活动的影响机制。
质谱分析技术(MassSpectrometry,MS)可对磷酸化蛋白质肽段残基进行测序,并进一步对磷酸化肽段和蛋白的鉴定。但电喷雾质谱是在正电模式下作用,而磷酸化肽段携带负电荷,两者冲突导致电离效果不好。且磷酸化肽段信号通常较弱,在大量非磷酸化蛋白的高背景下很难检测到低丰度的的磷酸化蛋白。上述问题可通过固定化金属亲和层析(IMAC)、TiO2亲和层析、泛磷酸化抗体富集等方法,对进入质谱之前的蛋白样品中的磷酸化肽段进行富集,提高磷酸化肽段的比率并提升磷酸化肽段检测范围,从而提高蛋白质磷酸化测序灵敏度和准确性。
百泰派克生物科技采用ThermoFisher的QExactiveHF质谱平台,OrbitrapFusion质谱平台,OrbitrapFusionLumos质谱平台结合Nano-LC,推出磷酸化定量蛋白组分析服务技术包裹。只需要将您的实验目的告诉我们并寄送样品,百泰派克生物科技负责项目后续,包括蛋白提取、蛋白酶切、磷酸化肽段富集、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析所有事宜。