土壤中性磷酸酶活性检测试剂盒(货号:AKEN)
土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的重要指标,土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响,通常按其最适pH范围分为碱性、中性和酸性磷酸酶。
土壤中性磷酸酶(S-NP)能够在中性环境中催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可表征土壤中性磷酸酶的活性。
土壤中性磷酸酶活性检测原理需自备试剂:无水乙醇(CHO,MW=46.07,CAS:64-17-5);甲苯(CH,MW=96.14,CAS:-88-3)
测定过程中所需要的仪器和试剂:可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱、乙醇、甲苯和蒸馏水。
1.土壤样本的处理(可根据预实验结果适当调整样本量和比例)
①称取0.1g风干土壤,加入0.05mL甲苯,缓慢混匀15min;
②加入0.4mL试剂一充分混匀,置于37℃恒温培养箱催化反应24h;
③反应完成后迅速加入1mL试剂二充分混匀,以终止酶催化反应,rpm常温离心10min,取上清即为待测样本,置于冰上待测。
吸光值测定:测定nm处吸光值,记为A测定、A标准和A空白;计算A测定=A测定-A空白,A标准=A标准-A空白。注:空白管和标准管只需测定1-2次。
标准曲线的建立:以1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1mol/mL为横坐标(x),以其对应的A标准为纵坐标(y),绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将A测定带入公式中得到x(mol/mL)。
①若测定吸光值超出标准吸光值线性范围:高于最高值建议将待测样本适当稀释后再进行测定,低于最低值建议适当增加样本后再进行测定,计算时相应修改即可;
②为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准),确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定,过程中问题请您及时与工作人员联系。
ForResearchUseOnly.NotforUseinDiagnosticProcedures.